上海橋星生物

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上海橋星生物提供的分子生物學試劑和試劑盒、美國聯合碳化和美國光譜醫學透析袋、培養基和培養耗材、細胞因子和細胞分離液、抗體和Elisa試劑盒及常用生物試劑等，Sigma、Amresco等各*大量現貨火爆*，歡迎登錄www.uplee.com.cn或、

Qiagen是世界各地研究人員*的的核酸純化品牌之一。良好的口碑、穩定可靠的質量，每年40％的強勁增長支持Qiagen強大的科研力量專注于核酸純化技術的不斷改革和創新，使得Qiagen的產品系列廣泛而全面，更成為眾多小品牌模仿和學習的目標。就如IBM筆記本電腦一樣，Qiagen奉行優價的政策，再加上關稅運費等因素，使得Qiagen在國內市場中成為“產品”的代名詞。常有實驗室的人說，如果是一般實驗就用國產的，如果是重要實驗就用Qiagen的。誠實的說，質量和價格一向都是成正比的，所以這樣一個*品牌到底在哪里還是值得我們去了解的。

    就質粒純化領域來說，作為用戶，提質粒關心的不外乎這幾個因素：
1． 獲得產物的純度，因為所得質粒純度和下游應用密切相關。
2． 產量/得率，根據個人需要獲得產物的量來選擇不同的純化量。
3． 速度和使用的方便程度，穩定性。使用試劑盒無非是為了快速方便和穩定。
4． 經濟性

  Qiagen的質粒純化產品線充分照顧了4種不同純度級別的需要（向下兼容）：
1． 轉染級――這種zui高純度的去內毒素的質粒純化，適用于基因治療、細胞顯微注射、DNA疫苗、基因沉默(RNAi)等要求嚴格的操作，以及轉染原代細胞、敏感細胞、懸浮細胞等對內毒素特別敏感的細胞株。
2． 常規轉染級――這種純度優于2次CsCl超速離心純化的質粒，適用于多數細胞的轉染實驗、特殊的修飾反應、BAC或者cosmid建庫等實驗
3． 分子生物學級――這種純度相當于1次CsCl超速離心純化的質粒，適用于常規的建庫和克隆實驗、部分細胞轉染、體外轉錄和體外翻譯實驗
4． 測序級――的初級純化標準更適合于常規酶切連接反應、高通量測序、PCR、探針合成、轉化等常規實驗

    就純化規模來說Qiagen的產品簡單可分為Mini(20ug), Midi(100ug-200ug)，Maxi(500ug-750ug)，Mega(2.5mg)，Giga(10mg)，甚至更高的100mg大規模純化。此外Qiagen還提供包括96孔板、8條管等高通量Mini純化試劑盒。作為看家產品之一，Qiagen的質粒純化產品得率是很高而且也很穩定的，一向都是質量的保證，不然也不會得到大家的一致認可。曾經某人很驕傲地告訴生物通：基本上，投訴Qiagen產品的zui終發現都是用戶自己的使用問題。Qiagen對自己的產品極為自信--zui嚴格的質量控制，加上科研人員的一致認可，你做不出來多半是自己的問題。當然Qiagen也在不斷改進說明書，甚至考慮提供中文版以減少誤會的發生。

    除了質量的穩定可靠之外，Qiagen的產品設計非常人性化，不斷改進以便充分滿足了越來越高的要求--更快，更方便。比如需要大量純化超純質粒時，經過溶液1，2，3處理后需要大容量高速離心機離心沉淀。Qiafilter的推出可以經過抽濾漏斗的形式快速抽濾，避免這一次較長時間的離心，而且過濾得更干凈--連偶爾出現懸浮在離心上清的細胞膜沉淀也可以*去除，令后面的純化更有效率。另外離心或者抽濾得到的上清都需要經過Qiagen重力離子交換柱，在低鹽和重力的作用下溶液流過交換樹脂，復性的質粒不斷被樹脂吸附，雜質隨溶液流出。的純化樹脂可以在不用酚氯仿等有機試劑的條件下極的純化質粒，但是制備質粒的規模越大，溶液越多，上柱的時間也越長。zui后用高鹽洗脫的質粒還需要經過異丙醇沉淀。為解決時間太長的問題，Qiagen推出了HiSpeed系列，離心或者抽濾得到的上清通過一個針管過濾器，質粒就可以地吸附在過濾器里的純化介質上，zui后很方便的洗脫。只需要20分鐘－半小時就可以完成原來需要2個多小時的過柱工作，而且不再需要大容量高速冷凍離心機了。對于沒有大離心機的實驗室真是很方便的。對于一些需要做BAC，粘粒等超大質粒純化的用戶來說，基因組片斷的污染和難以區分是一件煩人的事--Large Construct Kit就可以借助ATP依賴的DNA酶來消化線性的DNA而保留環狀質粒，*去除基因組片斷的污染。

    Qiagen的產品設計的細心和嚴謹可靠確實值得稱道。特別是對于有特殊高要求的用戶來說，Qiagen的質量是對得起這個價格的，每年兩次的*活動也算不錯的入貨機會。我們在這里簡單介紹一下Qiagen質粒純化產品

1 轉染級

    當你提取DNA是為了轉染原代、敏感或者懸浮的細胞；進行基因沉默研究、細胞注射顯微操作；進行基因治療或者DNA疫苗等要求極為嚴格的實驗，就應該考慮選擇以上兩種試劑盒。EndoFree系列是為了除去細菌中的內毒素而專門設計的。內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁上*的成分，它主要成分是脂多糖中的類脂A。它在細菌被裂解時被釋放出來，它的存在會極大程度地影響轉染效率。同時內毒素可以激活免疫細胞的非特異反應，造成實驗中的假陽性。

    EndoFree系列設計有特殊的Endotoxin removal buffer有效去除內毒素，使用此試劑盒提取的DNA內毒素含量小于0.1 EU/μg；同時引用了Qiagen*的QIAfilter的超純過濾技術，使得到的DNA純度相當于兩次氯化銫超速離心分離純化，而避免了常時間超離。試劑盒操作方便、快捷、結果穩定可靠；可以分別選取500ug、2.5mg、10mg的不同純化量。當提取低拷貝質粒時建議使用meg*試劑盒而不是gig*，原因是在過濾大量的細菌培養液時QIAfilter的過濾容量有限。
當你所需DNA用量十分巨大時，比如說DNA疫苗免疫動物，可以考慮使用Qiagen公司專門為純化核酸設計的采用了陰離子交換技術的Ultrapure 100 column。

    提取超純DNA時無需使用常規提取中有毒的化學試劑，如苯酚、氯仿、溴化乙啶、氯化銫等，將有害物質減小到zui少，從而更好的保護實驗操作人員的自身安全。

2 常規轉染級 

    當你進行普通轉染、構建文庫、對DNA進行修飾時可以考慮以上幾種試劑盒。當你用量較小時，可以考慮Plasmid Mini Kit和QIAwell 96 Ultra系列，其中QIAwell 96 Ultra系列采用8孔條或96孔板進行提取，可以利用機器人工作臺進行機械提取，重復性較好。用量較大時可以選用HiSpeed Plasmid和QIAGEN Plasmid/QIAfilter/Large Construct系列。Large Construct系列是專門為了大型質粒設計的，它采用*的ATP依賴核酸內切酶有選擇地消化了細菌的基因組DNA，使結果更加可靠。除了這種專門為大型DNA設計的試劑盒外，還有QIAwell 96 Ultra、HiSpeed Plasmid和QIAfilter系列也可以提取大至50kb的質粒。

    如果你有許多質粒要提取，那么可以采用QIAfilter系列以節省你的時間。此系列采用陰離子交換柱進行純化。中性的細菌裂解液直接裝入QIAfilter Cartridge中，在數秒內過濾除去雜質，將濾液裝入到陰離子交換裝置中，在低鹽、合適的pH值下質粒被選擇性的結合上去。利用中等鹽濃度的洗液去除RNA、蛋白、代謝物及其它低分子量雜質。用高鹽溶液將DNA洗脫，洗脫液用異丙醇沉淀，離心收集產物。

    如果你不需要很高的產率只是要求進一步提高速度，那么HiSpeed Plasmid系列將*。它的改進之處是在QIAfilter系列基礎上，將過柱和離心操作改為用注射器收集產物，這樣大大加快了提取的速度，將整個提取過程縮短到45或65分鐘。HiSpeed Midi系列純化載量是200ug，比原來的100ug大一倍，而HiSpeed Maxi的載量更高達750ug，比常規Maxi能純化更多的質粒。

3.分子生物學級

    相信在大多時候，你提取質粒就是進行分子生物學操作，如體外轉錄/翻譯，PCR，酶切等。在這個級別有兩個系列以供選擇。這兩個系列都可以提取大至50kb的質粒。QIAprep Spin則是采用應用zui廣泛的硅膠膜技術，用高鹽溶液離心過柱使DNA吸附，用低鹽溶液離心洗脫。得到的質粒相當于一次CsCl超速離心純化得到的純度，適合轉染生命力較強的細胞，體外轉錄/翻譯，長程測序，當然也包括常規的酶切，PCR等等。實際上這個純度非常高，一些常用細胞株的轉染也可以勝任；而酶切連接PCR這些實驗只需要載測序級純度的質粒就足夠了，用不著這么高純度。國產許多品牌都主戰于這個范圍，普通產品也能夠滿足一般酶切PCR等反應需要，因而個人以為這里Qiagen實在沒有什么優勢。生物通會在隨后介紹更為經濟實惠的國產篇。

    TurboFilter96孔板設計有非均勻的過濾裝置，在高鹽溶液下TurboFilter96孔板直接真空過濾細菌裂解液。除去大顆粒的濾液再經轉染生命力較強的細胞，體外轉錄/翻譯，長程測序過QIAprep 96孔板進行下一步的純化。此法需時少，而且重復性好。

4.測序級

    在人類基因組項目完成后，相繼有許多其它物種的基因組全序列被測出，這些都離不開測序技術的改進。以上三個系列都是為了高通量測序而設計的，它們在提取時都十分快捷、方便。DirectPrep 96 和MagAttract 96系列可以提取大至50kb的質粒，其中DirectPrep 96系列設計的裂解方式省略了清除裂解液這個步驟；而MagAttract 96系列采用的是磁珠技術，降低了試劑盒的成本。R.E.A.L. Prep 96系列采用的是快速堿裂解系統，除了一般的質粒，還可以提取cosmids, BACs, PACs, 和P1s等大型的載體。不過這個級別Qiagen沒有提供手工提取的試劑盒。其實我們不就要又便宜又快的東西嘛。

    Qiagen公司質粒提取試劑盒產品可以說是十分齊全的，相信無論你有什么樣的需求都可以找到一款適合自己的產品。